血友病A患者123例におけるF8遺伝子の変異解析：18の新規変異の同定

血友病A（HA）は、F8遺伝子の病原性変異によって引き起こされる出血性疾患であり、その変異はタンパク質構造に影響を与えるか、発現を減少させることでFVIII活性を損なう。F8変異体のスペクトルを拡大することは、遺伝子型と表現型の関係を解明し、正確な診断を促進するために不可欠である。115家系に属する123名のHA患者からデータを収集した。イントロン反転変異は逆方向配列ポリメラーゼ連鎖反応（IS-PCR）で検出され、一塩基多型（SNP）および小規模挿入欠失（インデル）の同定にはサンガーシーケンシングと全エクソームシーケンシング（WES）が用いられた。大規模変異の検出には多重リガーゼ依存性プローブ増幅法（MLPA）が適用された。さらに、スプライス部位変異を有する2例では、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）を用いてスプライスパターンの変化を検証した。123例中、55例（44.7%）がイントロン22逆位、2例（1.6%）がイントロン1逆位、28例（22.8%）がミスセンス変異、7例（5.7%）がナンセンス変異、7例（5.7%）がスプライス部位変異、18例（14.6%）が小規模インデル、6例（4.9%）が大規模変異を有していた。新規変異は計18例同定された。実験的検証により、軽症HA患者におけるc.144-26 A > C変異は2種類の追加的截断転写産物を生じ、FVIII不足を引き起こすことが判明した。重症HA患者におけるc.6116-1G > C変異は新規アクセプター部位を形成し、フレームシフト変異を引き起こした。遺伝子検査により、2例の患者の母親にモザイク現象が認められた。本研究はF8変異スペクトルを拡大するとともに、c.144-26 A > Cおよびc.6116-1G > C変異の病原性を実験的に実証し、関連変異の分子診断に有用な知見を提供した。