コンジュゲートワクチンの多糖修飾のO-フタルアルデヒドによる定量化。
アブストラクト
多糖類をベースとするワクチンは、T細胞依存的な免疫応答を引き起こすことができないため、乳幼児において長期にわたる免疫応答を刺激することができない。この問題はコンジュゲーション技術を用いて解決されてきた。コンジュゲーションでは、シアニル化、還元的アミノ化、エチレンジアミン反応など、さまざまなコンジュゲーション化学を用いてキャリアタンパク質を多糖類に結合させ、コンジュゲートを作製する。様々なコンジュゲーション技術を用いて製造された多くの糖鎖ワクチンは、新生児、乳児、幼児向けに既に市販されており(例えば、インフルエンザ菌b型ワクチン、肺炎球菌ワクチン、髄膜炎菌ワクチンなど)、いずれもT細胞依存性の免疫応答を引き起こす。糖結合体ワクチンを製造するには、まず莢膜多糖を活性化し、その水酸基をアルデヒド基、シアニル基、シアネートエステル基に変換する。多糖の酸化および還元されたアルデヒド官能基は、続いて還元的アミノ化によってキャリアタンパク質のアミノ基と反応し、安定なアミド結合を形成する。CDAPベースのコンジュゲーションでは、多糖の-OH基が活性化されてシアニル基またはシアネートエステル基を形成し、キャリアタンパク質のアミノ基と反応してイソウレア結合を形成する。多糖の活性化/修飾の程度を理解することは、コンジュゲートのモル質量、安定性、生成物の免疫原性に直接影響するため、不可欠である。還元的アミノ化によって生成した多糖のアルデヒド基を推定する方法は報告されている。しかしながら、1-シアノ-4-ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート(CDAP)によるシアニル化によって生成するシアニル基またはシアネートエステル(-OCN)基を定量する方法はない。我々は、O-フタルアルデヒド(OPA)誘導体化プロセスに続いて、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分離とUV検出を用いた新しい戦略について報告する。活性化された多糖類上のシアネートエステル基は、多糖類の活性化/修飾の程度と、精製されたコンジュゲート中の残存活性化基を直接明らかにする。この方法はCDAP化学を用いたコンジュゲートワクチンの製造に有用である。