ΔNS2/Δ1313/I1314LのFタンパク質の変異は、感染性の安定性とプレフュージョンFタンパク質の含有量を増加させる。
アブストラクト
呼吸器合胞体ウイルス(RSV)は、乳幼児における細気管支炎や肺炎の主要なウイルス性原因であるが、現在認可された小児用ワクチンはない。最近終了した第1/2相臨床試験で経鼻免疫として評価されている主要なワクチン候補は、RSV/ΔNS2/Δ1313/I1314L(以下、ΔNS2)と呼ばれるRSV A2株の弱毒化バージョンである。ΔNS2は、インターフェロン拮抗薬NS2遺伝子を欠失させ、Lポリメラーゼ蛋白遺伝子に温度感受性を付与するコドン欠失(Δ1313)を導入し、ミスセンス変異(I1314L)によって安定化させることにより弱毒化したものである。以前、第二のRSV株 "line 19 "に由来する4つのアミノ酸変化(I79M、K191R、T357K、N371Y)をA2株のFタンパク質に導入すると、感染性の安定性が増し、免疫原性の高いプレ融合(pre-F)コンフォメーションにあるFタンパク質の割合が増加した。本研究では、ΔNS2候補にこれら4つの「19番線」配列を導入し、ΔNS2-L19F-4Mを作製した。Vero細胞でのin vitro増殖において、ΔNS2-L19F-4MはΔNS2の親と同様の増殖速度およびピーク力価を示した。ΔNS2-L19F-4Mは、ΔNS2親株の4.5倍から5.0倍高いプレF/総F比を示し、プレFタンパク質の割合が増加した。4℃、25℃、32℃および37℃での培養中の感染性の安定性は、ΔNS2-L19F-4Mの方が大きかった;例えば、32℃で28日後、その力価はΔNS2の100倍であった。ΔNS2-L19F-4Mはヒト気道上皮(HAE)細胞でΔNS2と同程度の複製を示した。4つの "ライン19 "F変異は、Vero細胞での10ラウンドの継代継代の間、遺伝的に安定であった。アフリカミドリザルでは、ΔNS2-L19F-4MとΔNS2は同様の増殖速度、ピーク力価、免疫原性を示した。これらの結果は、ΔNS2-L19F-4Mが改良された弱毒生ワクチン候補であることを示唆しており、その安定性の向上は製造、保存、流通を簡素化する可能性がある。