RNA優先アプローチにより、X連鎖性低リン血症性くる病における深部イントロン内のPHEX変異体が同定された。

背景：X連鎖性低リン血症性くる病（XLH）患者の最大20％において、通常の分子診断検査で原因となる変異が同定されていない。目的：XLH患者におけるPHEXのミススプライシングを引き起こすイントロン変異を同定すること。設定：小児整形外科病院の代謝性骨疾患クリニック。

対象者： 臨床的にXLHと診断され、通常の検査でPHEX変異が検出されなかった患者4例（6～12歳、女性3例）。

主要評価項目： PHEXのRNAおよびDNAシークエンス解析。方法： 尿由来の細胞を培養し、mRNAを抽出・cDNAに転写した。PHEX cDNAをPCRで増幅し、PCR産物のシークエンス解析を実施した。RNA解析で観察されたミススプライシングを引き起こす変異を同定するため、PHEXイントロン領域のDNAシークエンス解析を行った。

結果：4例中3例でPHEXのミススプライシングが確認され、3例すべてでイントロン変異が同定されました。12歳の男児では、転写解析でPHEXエクソン13のスキッピングが観察され、PHEXイントロン領域のシーケンス解析でイントロン13に新規の18bp欠失が同定されました。7歳の女性では、PHEXイントロン17に偽エクソンが発見され、新規の深部イントロン変異（c.1768 + 173A > G）が隠れたスプライシングドナーサイトを活性化することが関連していました。最後に、11歳の女児において、再発性新規深部イントロン変異（c.2147 + 1197A > G）によるPHEXイントロン21の84bp偽エクソンが同定されました。

結論：尿由来細胞からのRNA解析とPHEXイントロンシーケンスを組み合わせることで、ルーチンなエクソン中心の分子診断で検出されないPHEX変異を有するXLH患者において、深部イントロン変異を同定可能です。