筋形成の正常およびジストロフィーヒト細胞モデルにおいて、偏りのない正規化された転写産物発現を評価するための最適な参照遺伝子。

患者由来の筋ジストロフィー性筋形成および分化細胞モデルは、治療候補アプローチの早期評価や変異に基づく評価を行う上で、貴重な前臨床ツールである。 こうしたモデル内での遺伝子発現の定量測定は、これらの研究において重要な役割を果たすが、RT-qPCRデータの正規化には、検証済みの安定発現参照遺伝子パネルが必要となる。本研究は、3つのヒト由来筋不死化細胞株（16歳のドナー由来の健常WT株1株、および2つのジストロフィー株、 DMD1（エクソン59にストップコドン変異を有する11歳の患者由来）およびDMD2（エクソン48-50欠失を有する14歳の患者由来）の3つのヒト由来筋細胞不死化細胞株において、RT-qPCRアッセイ用の安定な参照遺伝子を同定することを目的としている。 我々は14の候補遺伝子（ACTB、HPRT1、RPL13A、RPS18、GAPDH、ALAS1、UBC、YWHAZ、IPO8、PSMC4、HSP90AB1、NONO、CSNK2A2、AP3D1）のプールをスクリーニングし、増殖期から筋分化11日目までの発現の安定性を調査した。 データは、4つの補完的な手法（Bestkeeper、geNorm、Normfinder、DeltaCt）を用いて解析し、細胞株内および細胞株間で最も適切な参照遺伝子を特定した。本研究では、RPS18、UBC、YWHAZがすべての比較において高いスコアを示したことから、これらの3つの遺伝子が、遺伝子型や分化段階にかかわらず、これらの人間の筋形成細胞株にとって適切な参照パネルであると提案する。